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罗氏潮霉素B

罗氏潮霉素B

简要描述:罗氏潮霉素B 是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过抑制蛋白质合成而杀死细菌、真菌和高等真核细胞。

产品型号: 1g/20ml

所属分类:潮霉素B

更新时间:2020-10-21

详细说明:

品牌其他品牌规格500ML
供货周期现货应用领域医疗卫生

罗氏潮霉素B

货号

10 843 555 001

英文名称

Hygromycin B

规格

1g/20ml

单价($)

125.0

用途

抗病毒

类型

抗生素

保质期

自生产日期起48个月

储存条件

2°C to 8°C (避光保存)

运输条件

湿冰

潮霉素B作用机制:

        潮霉素B是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过抑制蛋白质合成而杀死细菌、真菌和高等真核细胞。潮霉素B通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成。目前常用于筛选和维持培养含潮霉素抗性基因的原核或真核细胞。 
抗性基因: 
对潮霉素B的抗性源自编码潮霉素B磷酸转移酶(Hph)的基因。至今发现两种来源: 
Streptomyces hygroscopicus产生的Hph抗性基因;
Escherichia coli,Klebsiella pneumoniae内质粒携带的Hph抗性基因(常用);  
罗氏潮霉素B生物应用: 
1) 筛选和维持培养稳定转染Hph 载体的原核细胞或真核细胞(植物细胞和哺乳动物细胞); 
2)由于作用模式的差异,常与G418 (GeneticinTM),Zeocin™和blasticidin S联合使用,筛选稳定转染两个不同载体的细胞株;
3)抗病毒剂,由于潮霉素B选择性渗透进入因为病毒感染增强通透性的细胞,而且具有抑制翻译的功效;
4)作为驱虫药加入动物饲料; 
双抗性稳定转染细胞筛选的抗生素作用机制及抗性
抗生素抗性机制抗性基因哺乳动物筛选浓度
潮霉素B干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读Hph200~500μg/mL
G418干扰80S核糖体功能和抑制蛋白合成Tn5/Tn601100~1000μg/mL
Zeocin掺入或者切割DNA引起细胞死亡Sh ble50~100μg/mL
blasticidin S核糖体上抑制肽键形成Bsd/BSD3~50μg/mL

 
罗氏潮霉素B应用浓度: 
潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化。推荐使用浓度为50-1000 μg/mL,浓度需要杀灭曲线来确定。 
哺乳动物细胞·200-500 μg/mL;细菌/植物细胞·100-300 μg/mL;真菌·300-1000μg/mL; 
 
罗氏潮霉素B产品使用:
使用一:杀灭曲线确定佳杀死浓度(仅作参考,因个人检测体系而异)
(1)往组织培养级的96孔板内加入未转染细胞,细胞密度约50-200细胞/孔;细胞贴壁之后,往每孔加入含不同浓度(如50-1000μg/mL,至少5个浓度)潮霉素B的200μL新鲜培养基;
(2)37℃,5% CO2培养箱孵育细胞10-14天;
(3)培养5-7天后更换新的培养液,培养液内含有相应浓度的潮霉素B;
(4)10-14天后使用细胞增殖方法如MTT,CCK-8等评估细胞活力;也可以通过检测细胞克隆数或百分比汇合率来确定毒性效应。一般选择在10-14天能够杀死所有细胞的小浓度为佳筛选浓度。
使用二:筛选稳定转染细胞
(1)对于贴壁细胞,直接吸去60mm培养皿内的转染细胞培养基,然后加入含有潮霉素B的新鲜培养基5-6ml;对于悬浮细胞,无菌条件250x g,离心10min除去旧的转染细胞培养基,然后悬浮在约5ml的含潮霉素B的新鲜培养基;
(2) 5-7天后,如上方法更换含有潮霉素B的新鲜培养基;
(3) 再孵育细胞5-7天;
(4) 10-14天孵育后,培养体系中只含有能够表达潮霉素B抗性表型的活细胞。因此筛选之后如步骤一,更换不含潮霉素B的新鲜培养基。 



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