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胎牛血清使用中常见问题的解答

发布时间:2021-02-22 点击量:75
   胎牛血清是一种性状、外观 浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛。显然,胎牛血清是品质zui高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分少。

南美胎牛血清

  胎牛血清使用中常见问题的解答:
  1、问:加到培养基中的血清必须灭活吗?
  答:不是必须的,看做什么实验了。
  2、问:胎牛血清灭活是56℃ 30分钟吗?
  答:如果用于培养大多数的肿瘤细胞,血清一般是不需要灭活的,这样可以有效保存血清中的生长因子。 但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞,如内皮细胞,血清是 需要灭活,一般是56℃,30min。
  3、问:我要做滋养细胞培养,胎牛血清要灭活吗?
  答:进口的一般都已灭活,国产的不一定,尽量还是灭活一下再用较安全。
  4、问:我用病毒上清转染细胞,培养用的血清需要灭活吗?
  因为血清中可能有些补体和抗体,是不是会影 响转染?我想未灭活的血清中含些抗体补体可能会和病毒相结合,影响 转染,正确吗?细胞是单核细胞白血病细胞, 病毒是病毒包装细胞PT67收集的病毒上清。为什么要用无血清培养基加病毒孵育几小时,目的是什么?
  答:血清一定要灭活,可以先用无血清培养基加病毒孵育几小时以后再加血清。避免杂蛋白对病毒和宿主 结合过程的干扰,一般是2-6小时,根据细胞的状态决定。血清不一定需 要灭活,灭活的目的是将血清中的补体灭活 !这要根据实际情况而定,如果没有把握那就灭活吧,也不麻烦56度半个小时。
  5、问:因为实验室水浴锅失控,血清灭活时,温度到了61.7℃,这血清还能用吗?
  答:多长时间啊?短时间应该可以吧,我有一次加热了一个多小时,还照样用。
  6、问:我灭活胎牛血清时,用的电磁炉,定在了70℃,本来说调温度到56℃再放血清的,后来忘了,就把 血清放进去了,所以灭活的温度肯定超过56℃了,不知道这样对血清 有没有影响?
  答:常规灭活建议的温度在45℃到62℃之间,而时间则从15分钟到60分钟不等,其中常用的手法是56℃ 热处理30分钟。看看你养的细胞是什么,一般的话估计问题不大,要是 很珍贵的细胞还是慎重一点啊。热灭活目的是 为了去除血清中补体等对热敏感的物质, 在对补体灭活以外,热处理同时也对血清中可能存在的支原体具有灭活作 用。现在好像不主张热 灭活,热灭活经常给血清产品带来负面影响,对血清的加热经常导致血清中沉淀的产生,此外 ,有研究结果证实热灭活步骤减弱了胎牛血清和小牛血清对细胞的促粘附作用。
  胎牛血清主要用途:
  牛血清是细胞培养中用量大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。
  1.提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。
  2. 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。
  3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。
  4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
  5.起酸碱度缓冲液作用。
  6.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。