当前位置:网站首页技术文章 > 防止胎牛血清在培养中产生黑点的有效方法
产品中心products

防止胎牛血清在培养中产生黑点的有效方法

发布时间:2021-03-16 点击量:97
   胎牛血清,由胎牛血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。牛血清是细胞培养中用量大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能:提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。起酸碱度缓冲液作用。胎牛血清还是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源,并提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。除此之外,胎牛血清在细胞消化过程中提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。
  防止胎牛血清在培养中产生黑点的有效方法:
  (1) 尽可能地减少血清冻融次数。
  (2) 培养基无需 37℃水浴。
  (3) 培养基保持JIA PH 值 7.0- 7.2。
  (4) 严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗。
  (5) 掌握细胞传代的JIA时机,细胞切勿生长过老。
  1、 化冻
  将血清从-20 度冰箱中取出,室温(或浸于自来水中)化冻(约需要 30 分钟至 2 小时,也可放于 4 度冰箱化冻过夜;化冻后若不马上灭活,可以放入 4 度冰箱中暂时保存)
  2、灭活
  (1)放入室温的水浴锅内开始加热(同时放入一个空的血清瓶,内装 100ml 自来水,插入一根温度 计,温度监控以此为准)
  (2)当温度计显示 56 度时,停止加热,改为间断加热,维持 56 度(±0.5 度)30 分钟(±3 分钟; 若不小心使温度上升超过 56 度,则:若仍未超过 60 度,且时间很短,比如不超过 5 分钟,则仍可使 用;若超过 60 度,或者时间较长,则弃去不用,或者尝试用于一些普通细胞的培养)
  (3)取出,自然冷却至室温(约需 1-3 小时) ,可分装或-20 度继续冻存。
  3、分装
  (1)转入无菌间,在超净台内将血清分装入 10ml 离心管中(注意预先要将血清轻轻摇动数周、混匀; 用吸液管或吹大管吹出血清时要注意:不要吹出气泡(血清很粘稠,很容易产生气泡;如果产生气泡, 则在酒精灯火焰上过一下) )
  (2)放入-20 度冰箱冻存
  (3)全部操作约需要 4-6 小时
  感谢你的观看,希望对您有所帮助噢!