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无血清冻存液的细胞冻存步骤和复苏步骤

发布时间:2020-12-10 点击量:367
   无血清细胞冻存液通用于各种动物细胞株(肿瘤细胞和常规细胞),冻存细胞可在-80℃长期保存(>5年)。配方成分明确,不含动物来源性蛋白,不含血清,可减少各类细菌、病毒和支原体等污染,保证冻存细胞的安全。该冻存液含DMSO、葡萄糖等各种细胞营养成分,提高细胞存活率和活力,亦适合于无血清培养细胞和蛋白表达细胞。

无血清冻存液

  操作步骤:
  细胞冻存步骤:
  1. 常规方法收集对数期的贴壁细胞或悬浮细胞于试管中。
  2. 根据培养细胞的密度和冻存管的大小确定所需冻存细胞数。
  3. 将所需数目的细胞悬浮液置于离心管中,1000rmp,5分钟离心收集培养细胞沉淀,彻底弃去离心管中的上清液。
  4. 加入适量的CELLSAVING?细胞冻存液于离心管中,使细胞浓度约为5×105-1×107/ml。轻柔地混匀细胞,制成细胞混合液。
  5. 将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管中,建议每管1ml或1.5ml。
  6. 直接将分装好的细胞冻存管放入-80℃超低温冰箱中,可长期冷冻保存。
  7. 如果想液氮中长期保存,需先放入-80℃冰箱至少一天时间,方可移至液氮罐中保存。
  冻存细胞复苏步骤:
  1. 从冰箱中取出冻存的细胞,立即放入37℃水浴槽中快速解冻。
  2. 待冻存管中细胞混合液完全融化后,将其中的混合液移至离心管中,1000rmp,5分钟离心收集冻存细胞沉淀,移去上清液(操作时 小心,切勿将细胞沉淀移去)。
  3. 加入适量的新鲜细胞培养基,使用移液管缓缓加入到细胞沉淀,轻柔地混匀,将细胞混合液移至事先准备好的培养容器中。
  4. 镜检细胞后,可根据各自研究的需要和方法经行细胞常规培养。
  无血清细胞冻存液,含多种保护剂成分。一些保护剂,易于穿透细胞,避免细胞内部水分子形成冰晶损伤细胞,同时另一些保护剂不能穿透细胞,但可以在冰晶形成之前,优先结合细胞外的水分子,降低细胞外溶液的电解质浓度,减少阳离子进入细胞的数量,为多种保护剂组合,在细胞内外进行双重保护,大大提高了细胞复苏存活率。无血清细胞冻存液不含牛血清,无动物源组份。2-8℃即可稳定保存,无需冷冻,即取即用。冻存细胞,无需程序降温。冻存细胞复苏率在90%以上。
  以上内容仅供参考,希望对您有所帮助!