无血清冻存液的细胞冻存步骤和复苏步骤

　　操作步骤：

　　细胞冻存步骤：

　　1. 常规方法收集对数期的贴壁细胞或悬浮细胞于试管中。

　　2. 根据培养细胞的密度和冻存管的大小确定所需冻存细胞数。

　　3. 将所需数目的细胞悬浮液置于离心管中，1000rmp，5分钟离心收集培养细胞沉淀，*弃去离心管中的上清液。

　　4. 加入适量的CELLSAVING?细胞冻存液于离心管中，使细胞浓度约为5×105-1×107/ml。轻柔地混匀细胞，制成细胞混合液。

　　5. 将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管中，建议每管1ml或1.5ml。

　　6. 直接将分装好的细胞冻存管放入-80℃超低温冰箱中，可长期冷冻保存。

　　7. 如果想液氮中长期保存，需先放入-80℃冰箱至少一天时间，方可移至液氮罐中保存。

　　冻存细胞复苏步骤：

　　1. 从冰箱中取出冻存的细胞，立即放入37℃水浴槽中快速解冻。

　　2. 待冻存管中细胞混合液*融化后，将其中的混合液移至离心管中，1000rmp，5分钟离心收集冻存细胞沉淀，移去上清液（操作时 小心，切勿将细胞沉淀移去）。

　　3. 加入适量的新鲜细胞培养基，使用移液管缓缓加入到细胞沉淀，轻柔地混匀，将细胞混合液移至事先准备好的培养容器中。

　　4. 镜检细胞后，可根据各自研究的需要和方法经行细胞常规培养。

　　无血清细胞冻存液，含多种保护剂成分。一些保护剂，易于穿透细胞，避免细胞内部水分子形成冰晶损伤细胞，同时另一些保护剂不能穿透细胞，但可以在冰晶形成之前，优先结合细胞外的水分子，降低细胞外溶液的电解质浓度，减少阳离子进入细胞的数量，为多种保护剂组合，在细胞内外进行双重保护，大大提高了细胞复苏存活率。无血清细胞冻存液不含牛血清，无动物源组份。2-8℃即可稳定保存，无需冷冻，即取即用。冻存细胞，无需程序降温。冻存细胞复苏率在90%以上。

　　以上内容仅供参考，希望对您有所帮助！