血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等,其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。氨基酸有多种,是细胞合成蛋白质的基本成分,其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成(称为必需氨基酸)。血清含有的激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子(如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长因子等)。血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促粘附因子及其他活性物质,能促进细胞的生长、增殖和贴附。
胎牛血清不清澈,血清里面会有很多透明的絮状的东西怎么办?
如果您是从正规渠道购买的话,是没有问题的。进口胎牛血清或多或少总有点溶血,因为真正的胎牛血清凝血功能差,红细胞容易破裂,且采血后集中处理。而国产血清的采血点很分散,大多是由屠户采血后马上离心收集,所以很少会有溶血,表现出明亮的蜡黄色,当然,国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清国产的血清呈现出蜡黄。总之,进口的血清,质量的呈现出谈黄、微红色,差点的呈现出橘红色或鲜红色。
至于沉淀问题,很多血清客户,会发现进口血清有沉淀,从而怀疑血清的质量问题,这是没有根据的。血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生,对血清质量没有任何影响,沉淀的产生原因很多,和厂家的加工生产方式密切相关。国产的血清,大多来自北方,由于价格低廉,保存环境都不好,从采血、冷冻、运输到生产会经过多次冻融,每次冻融过程,就会析出部分纤维蛋白沉淀,这样,血清成品过滤后看起来反而更加的“干净”,很少有沉淀产生。进口的胎牛血清,过滤分装前很少会反复冻融,生产后的成品也是清澈的,但随着时间的推移,血清中的大量纤维蛋白会析出形成沉淀。当然,进口的新生牛血清,一般牛龄都在2周左右,血清中的各种蛋白含量明显偏高,生产后血清可能会浑浊,甚至有大量沉淀。当然,购买回来的血清都是冰冻状态,使用时需要融化,融化过程在温度较低的状态下慢慢进行,否则沉淀相对较多,虽然沉淀并不直接影响血清的质量,但对细胞的显微观察有一定的阻碍。
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胎牛血清注意事项:
1. 血清解冻与存放:-20℃取出后建议放入2~8℃冰箱中解冻约,每隔一段时间轻轻摇晃均匀,不可直接放入温度较高处解冻,避免因温度改变太大,造成蛋白质凝集而出现沉淀,血清的质量下降。若短期无法用完一瓶,建议无菌分装,再放回冷冻,避免反复冻融。4℃长时间保存后血清中的变性脂蛋白及纤维蛋白,形成絮状物质变差。
2. 血清是否灭活:加热可灭活血清中补体系统,在极少数情况下(培养ES细胞,平滑肌细胞时)建议灭活,在培养其余细胞时不建议灭活血清。血清灭活非常容易产生沉淀,如必须灭活请按56℃,30 min,轻微摇晃原则操作,灭活温度高、时间长、摇晃不均都容易产生沉淀。
3.无血清培养基:无血清培养基在结果重复性、细胞体外分化方面有优势,但是,血清仍然是培养液中基本的添加物,尤其是在原代培养或细胞生长状态不良时,常常会先使用有血清的培养液进行培养,待细胞生长旺盛后再换成无血清培养液。