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无外泌体血清的制备步骤及注意事项

发布时间:2021-08-11 点击量:53
   无外泌体血清是一种可由多种细胞分泌的直径为30-150nm的膜性小囊泡。经研究后发现,其内含有独特的蛋白质与核酸分子,所含成份与其细胞来源密切相关,这也决定了无外泌体血清的功能特异性,如抗原提呈、信号传导或诱导抗肿瘤免疫反应、细胞迁移、细胞分化、细胞间通信、肿瘤转移等。目前,无外泌体血清研究已经成为临床诊断与基础医生的新热点。
  无外泌体血清制备步骤:
  1. 根据需要处理的血清体积选择合适的转子与超离管。
  2. 在超净工作台,将普通血清置于超离管中,配平后,进行热封口。
  3. 将封口后的超离管放于离心机转子中,并加入相应适配器然后拧紧转头盖。
  4. 设置离心程序:4℃,120,000 ×g,离心18小时(也有研究者选择100,000 ×g离心18小时)。
  5. 离心结束后,回收上清液,为避免污染,在超净工作台操作。
  6. 收集得到无外泌体血清,并储存于-20℃中备用。
  注意事项请注意了:
  1:离心后,血清外泌体会富集在管底和管壁;
  2:吸取血清时,只吸取澄清部分的血清,并且远离上图中标记的区域;
  3:吸取70-80%的澄清的血清;(注意:动作慢,动作轻)
  4:其余的浑浊血清留作正常细胞的的营养物添加使用,避免浪费。
  5:如果觉得纯度不够,再把离心后收集的血清做二次超速离心。
  6:针对超速离心后的血清,必须进行粒径检测(离心前样品和离心后样品),该数据可以放到文章补充材料中,用来证明无血清外泌体制备成功。
 

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